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SMART檢測左旋咪唑對NGM系統培養秀麗隱桿線蟲的影響

瀏覽次數:666 發布日期:2025-1-7  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

許多膽堿能藥物已被用于分析特定的突變體和行為;然而,對秀麗隱桿線蟲神經生物學影響最大的兩種藥物是涕-滅-威和左旋咪唑。使用WMicrotracker SMART,可以很容易地量化乙酰膽堿通道調節劑的作用和動力學,以及其他參與行為的神經元通道。WMicrotracker SMART是我們的新技術,通過它你可以獲得小動物種群在時間和空間上的行為的詳細信息,包括多蠕蟲路徑跟蹤。下面我們給出一個應用程序示例。

P35中左旋咪唑對秀麗隱桿線蟲麻痹的動力學研究
 
WMicrotracker SMART能夠獲取并繪制一群蠕蟲的路徑跟蹤,實時計算平均移動速度。左旋咪唑濃度處理(0至200uM)的動力學圖如下所示。圖中顯示了左旋咪唑濃度與運動速度下降的相關性。

利用每小時5分鐘的采集延時,WMicrotracker SMART能夠量化左旋咪唑麻痹對秀麗隱桿線蟲的影響。

Protocol步驟:

1,在NGM培養皿中同步培養日1蟲成蟲種群(OP50)。
2,用M9緩沖液將蠕蟲從培養皿中取出,并將其轉移到無菌2ml微管中。
3,讓蟲子靜下來。倒入上清,注意不要擾亂顆粒;
4,用2ml M9緩沖液進行清洗。短暫搖動或翻轉試管;
5,重復上述步驟。把上清倒掉;
6,加入2ml M9緩沖液;
7,計算10µl內的蟲數,一式三份,計算平均值;
8,準備懸浮液,得到[25蟲/10µl];
9,將10µl蠕蟲溶液轉移到35mm板上,等到水滴被吸收。
10,5分鐘后,在5分鐘內使用WMicrotracker SMART注冊蠕蟲活動。在獲取之前,通過對平板進行機械刺激來刺激蠕蟲。


微孔板準備:

按照標準程序制備NGM;
在加入鹽和膽固醇后立即將左旋咪唑加入55°C的NGM瓊脂溶液中;
左旋咪唑板未接種OP50;
測定是在實驗開始前已將模板降到室溫的板上進行的;
在將蠕蟲添加到每個板之前,在每個板的邊緣做一個100mm硫酸銅環,以防止蠕蟲爬出瓊脂;
當添加蠕蟲時,要小心不要刮傷瓊脂-蠕蟲往往會爬進瓊脂表面的任何裂縫;

在本實驗中,我們觀察了左旋咪唑處理在NGM培養基中培養的秀麗隱桿線蟲群體中的動力學效應。

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