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植物活體成像系統助力HSFA6b介導擬南芥線粒體未折疊蛋白反應研究

瀏覽次數:1008 發布日期:2024-11-29  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
線粒體是真核生物的重要細胞器,參與多種代謝過程。線粒體蛋白毒性脅迫能夠引起線粒體未折疊蛋白反應(UPRmt),該反應能夠恢復線粒體蛋白穩態,維持植物體正常的生命活動。擬南芥中UPRmt反應的調控機制仍有待研究。之前的研究表明,UPRmt反應能夠激活熱休克蛋白基因(HSP)的表達。

近期,《Plants》刊登的一項新研究宣布,研究團隊發現熱休克轉錄因子HSFA6b是調節UPRmt反應的關鍵調控因子。HSFA6b在線粒體蛋白毒性脅迫下,能促進線粒體熱休克蛋白基因(mtHSPs)的表達。用線粒體核糖體翻譯抑制劑-多西環素(Dox)處理后,HSFA6b移動到細胞核內,與mtHSPs基因啟動子結合,激活mtHSPs的表達。在線粒體蛋白毒性脅迫下,HSFA6b基因突變體在發育過程中,阻斷了UPRmt反應,促進了根系生長,加速了葉片衰老。該研究成果揭示了UPRmt反應中一種新穎的信號調節機制,并為UPRmt反應調控植物體生長發育和抗逆性提供了新的見解。

以往對UPRmt信號傳導機制的研究中發現,在線粒體核糖體蛋白突變或化學干擾的擬南芥中,UPRmt信號通路被激活,從而促進下游mtHSPs基因的表達。研究團隊選擇了5個HSP基因(HSP60-2、HSP60-3A、HSP60-3B、mtHSC70-1和mtHSC70-5)作為潛在的候選報告基因。利用煙草瞬時轉化系統進行了啟動子活性檢測試驗。經Dox處理12 h后,與其他4個啟動子相比,mtHSC70-5的啟動子活性顯著升高。因此,mtHSC70-5可以作為線粒體UPRmt信號通路的報告基因。利用數據庫對可能與mtHSC70-5啟動子區域結合的轉錄因子進行了分析,選擇了8個可能激活mtHSC70-5表達的候選轉錄因子。


圖1 轉錄因子活性篩選

在每個轉錄激活實驗中,共注射10片煙葉。圖中的圖像代表了實驗設置,并繪制了實驗組和對照組的平均相對熒光值。實驗采用3個生物重復,對平均值采用配對雙樣本t檢驗來分析顯著性差異(ns,p > 0.05;**,p < 0.01),誤差值以標準誤差表示。

經實驗驗證,只有HSFA6b對mtHSC70-5啟動子活性表現出較強的激活作用(圖1),而其他的則表現出抑制作用或無明顯變化。因此,研究團隊選擇HSFA6b進行進一步功能驗證。

在上述實驗中,研究團隊使用了勤翔IVScope 7000系列植物活體成像系統進行圖像采集和數據分析計算。
發布者:上海勤翔科學儀器有限公司
聯系電話:021-65332202
E-mail:info@clinx.cn

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