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ISCO應用:將TLC與等度洗脫分離相關聯Rf到CV轉換

瀏覽次數:1355 發布日期:2024-9-24  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
一、應用概述

在使用Teledyne ISCO的CombiFlash®系統時,或者在純化沒有色團的化合物時,可以使用薄層色譜法(TLC)來定位收集到的餾分中的純化化合物。

如果已知化合物的保留因子(Rf),則可以根據柱體積估計含有所需物質的餾分收集管。柱體積是裝填柱的空隙(空余)體積。這一規格在所有RediSep®色譜柱的色譜應用說明3中都有列出。

了解Rf和柱體積可以讓您大致了解化合物可能位于哪些餾分收集管的范圍。

二、一般方法    

將待分離的化合物加載到TLC板上,并分離成幾個種類。

控制參數    

TLC的幾個參數必須保持一致以獲得良好的相關性。

• TLC溶劑應以體積比的方式量取,以便混合物在轉移到梯度生成系統時保持恒定。

• 為了獲得最佳結果,建議對層析室和板進行平衡。

• 推薦將板運行至距離板頂部1-4厘米以內,以實現良好的分離。

• 在運行板之前,應標記樣品斑點位置和溶劑水平。

• 應在運行結束時標記溶劑洗脫高度和樣品斑點位置。

• 在進行TLC時,層析室中的溶劑水平絕不能觸及樣品,并且應覆蓋層析室以維持氣相中的平衡。

假設    

有幾個假設:

• 色譜柱和TLC板使用相同類型的固定相。

• TLC方法中使用的溶劑與液體分離中使用的溶劑相同。

因此,液體分離必須是等度洗脫。

• TLC的Rf應小于0.5且大于0.1,如果不是這樣,則可能需要不同的溶劑系統。

Rf    

Rf — 保留因子。樣品斑點移動的距離。Rf通過以下公式計算:

   

Zx — 斑點從其起始點(樣品線)移動的距離。請參考圖1和圖2。

Zf — 從原始溶劑線到最終溶劑前沿的距離。

Z0 — 從溶劑線到樣品線的距離。

       

圖1:TLC起始

   

圖2:TLC完成

柱體積相關性    

一旦知道了混合物中某個組分的Rf,就可以與柱體積(CV)建立相關性。 

如果Rf值在0.1和0.5之間,它可以被輸入到以下公式中,以給出收集管的范圍。

   
其中:

Volc — 柱的空隙體積。

Volf — 每個管中收集的餾分體積。

三、示例

請參考圖3。

   
圖3:TLC示例

一個丙酮斑點洗脫了62毫米(Zx=62毫米),溶劑水平到水平樣品線的距離是8毫米(Z0=8毫米),溶劑前沿移動的距離是170毫米(Zf=170毫米)。Rf是無量綱的,所以單位被省略,進行計算:

   
為了將這與通過柱體積為16.8 mL的12克RediSep柱進行的純化相關聯,并收集為10 mL的餾分,將Rf應用到以下公式中:
   
   

四、計算機

人們可以輕松使用Microsoft® Excel®或其他電子表格程序來創建Rf和試管相關性計算器:

   

圖4:Rf和試管相關性計算器

五、參考    

Colin F. Poole and Salwa K. Poole, “Chromatography Today”, Elsevier Science Publishers B.V., 649-667, (1991).

發布者:培安有限公司
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