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傷口愈合遷移實(shí)驗(yàn)怎樣劃出標(biāo)準(zhǔn)筆直的方法和應(yīng)用

瀏覽次數(shù):2504 發(fā)布日期:2022-11-27  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
傷口愈合試驗(yàn)和遷移試驗(yàn)的原理

傷口愈合和遷移試驗(yàn)的應(yīng)用
 

細(xì)胞遷移發(fā)生在許多重要的生理過(guò)程中。例如,受控的細(xì)胞遷移允許胚胎發(fā)育、組織損傷和傷口愈合。相反,細(xì)胞遷移在許多病理情況下失調(diào),例如癌癥轉(zhuǎn)移和炎癥。毫不奇怪,細(xì)胞遷移背后的原理已在許多情況下得到研究。


傷口愈合測(cè)定和遷移測(cè)定是廣泛用于分析不同條件下細(xì)胞遷移的方法。他們深入了解以下相關(guān)科學(xué)主題:

  • 條件遷移和傷口愈合研究:細(xì)胞如何在不同條件下遷移(例如,用特定化合物/增強(qiáng)劑/抑制劑處理后,使用 siRNA 或 CRISPR/Cas9 進(jìn)行基因沉默后,改變底物剛度后,或改變基質(zhì)組成后)?

  • 高通量藥物篩選:哪種藥物會(huì)改變特定細(xì)胞類型(例如癌細(xì)胞)的遷移率?

  • 細(xì)胞相互作用研究細(xì)胞是保持接觸還是單獨(dú)遷移?細(xì)胞在遷移過(guò)程中如何相互作用?什么是細(xì)胞自主遷移能力?

  • 2D Invasion Assays:兩種不同的細(xì)胞類型如何相互作用(例如,腫瘤細(xì)胞和成纖維細(xì)胞)?

 
二維入侵檢測(cè)中的兩種不同細(xì)胞類型。數(shù)據(jù)由德國(guó)萊比錫大學(xué)的 C. Matern 和 KD Nnetu 提供。

抑制劑或促進(jìn)劑對(duì)傷口愈合影響的實(shí)例分析。

 

與一般傷口愈合和遷移測(cè)定相比,定向遷移測(cè)定(例如趨化性測(cè)定)測(cè)量 2D 或 3D 環(huán)境中的梯度依賴性細(xì)胞運(yùn)動(dòng)。
 

2
如何進(jìn)行傷口愈合試驗(yàn)/遷移試驗(yàn)

傷口愈合測(cè)定/遷移測(cè)定的最具特征的讀數(shù)是細(xì)胞覆蓋區(qū)域(間隙閉合)隨時(shí)間的變化。進(jìn)行傷口愈合和遷移試驗(yàn)是一個(gè)簡(jiǎn)單的過(guò)程:

  1. 在細(xì)胞單層內(nèi)創(chuàng)建一個(gè)物理間隙。

  2. 通過(guò)活細(xì)胞成像或在不同時(shí)間點(diǎn)拍照來(lái)監(jiān)測(cè)細(xì)胞遷移到間隙的過(guò)程。

  3. 手動(dòng)或使用自動(dòng)化軟件分析間隙閉合率,這是典型的實(shí)驗(yàn)讀數(shù)。
     

    ibidi Culture-Insert 2 孔| 3 孔| 4孔是硅膠插件,具有明確的無(wú)細(xì)胞間隙,用于傷口愈合、遷移、2D 侵襲檢測(cè)和細(xì)胞共培養(yǎng)。


    盡管傷口愈合試驗(yàn)明顯簡(jiǎn)單,但許多因素會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,因此必須加以控制。在以下部分中,您將了解傷口愈合檢測(cè)的原理和設(shè)置。此外,我們將討論 需要標(biāo)準(zhǔn)化的參數(shù),以實(shí)現(xiàn)可重現(xiàn)的、穩(wěn)健的結(jié)果。


     

    使用 ibidi Stage Top 孵育系統(tǒng)的活細(xì)胞成像顯示了 MCF7 細(xì)胞在傷口愈合和遷移試驗(yàn)中的間隙閉合。相襯; 10 倍物鏡。



    參考文獻(xiàn):

    J.E.N. Jonkman, et al. An introduction to the wound healing assay using live-cell microscopy. Cell Adh Migr, 2014, 10.4161/cam.36224

     

    W.J. Ashby, A. Zijlstra. Established and novel methods of interrogating two-dimensional cell migration. Integr Biol 2012, 10.1039/c2ib20154b
     

     

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