外泌體研究之血清外泌體提取純化操作詳解
▌試劑盒選用 | 血清、血漿
| CGS Exo-spin kit | 柱床長度 | 處理樣本量/柱 | 試劑盒 | 適用樣本類型 |
| EX02 mini blood | 1.3 cm | 100-500 μL | SEC管柱、沉淀劑、PBS | 血清、血漿 |
| EX03 mini columns | 1.3 cm | 100 μL | SEC管柱 | 血清、血漿 |
| EX05 mini-HD | 6.35 cm | 150 μL | SEC管柱 | 血清、血漿 |
| EX04 midi | 2.15 cm | 1 mL | SEC管柱 | 血清、血漿 |
| EX07 Exo-spin 96 | 1.3 cm | 100-500 μL | SEC管柱 | 血清、血漿 |
▌試劑盒保存
產品常溫運輸。收到產品后，請于4℃保存，可以穩定保存一年。
▌操作流程
▌血清樣本（ 100-500 µL）-試劑盒Exo-spin EX02, EX07-96
01、樣本預處理-去除細胞和細胞碎片
a、300 x g 離心 10 min 以去除細胞，取上清。
b、16,000 x g 離心 30 min，以去除細胞碎片，取上清。
02、沉淀外泌體（若血清樣本為100 µL則無需進行沉淀步驟）
a、以 1:2 的比例加入沉淀劑（例如，將 250 µL沉淀劑添加到 500 µL 血清樣本中）。
b、顛倒離心管混勻，并在 4°C 孵育至少 5 min。
c、將混合液以 16,000 x g 離心 30 min，棄去上清液。
d、用 100 µL PBS 重懸含有外泌體的沉淀。
03、外泌體純化
a、將100 µL外泌體重懸液加入純化管柱（預處理后的）頂端。
b、讓液體在重力作用下進入柱基質中，丟棄流出液。
c、將純化管柱置入新的 1.5 mL 離心管以收獲外泌體；加入180 μL PBS至純化管柱頂端， 并通過重力洗脫。
d、將含有分離外泌體的樣本收集管以 100 x g 短暫離心30 s，以便將所有液體收集到管底部，分離的外泌體即可用于下游應用。
▌Exo-spin 提取外泌體數據結果
Exo-spin提取的血清外泌體顯示出優異的得率和純度。通過納米顆粒追蹤分析（NTA）檢測，每條曲線代表不同分離方法得到外泌體的3次技術重復測量的平均值。（PM=沉淀法，數據來源Martins, TS et al., 2018).
NTA和EXOCET分析對比Exo-spin與沉淀法提取的血清外泌體樣本
▌Exo-spin外泌體提取試劑盒部分引用參考文獻
• Lobos-González L, Bustos R, Campos A, et al (2020). Exosomes released upon mitochondrial ASncmtRNA knockdown reduce tumorigenic properties of malignant breast cancer cells. Scientific Reports 15;10(1):343.
• Bliss CM, Parsons AJ, Nachbagauer R, et al (2019). Targeting Antigen to the Surface of EVs Improves the In Vivo Immunogenicity of Human and Non-human Adenoviral Vaccines in Mice. Molecular Therapy - Methods & Clinical Development 24;16:108-125.
• Yang Y, Knight R, Stephens P, et al (2019). Three-dimensional culture of oral progenitor cells: Effects on small extracellular vesicles production and proliferative function. The Journal of Oral Pathology & Medicine 1.
• Corsello T, Kudlicki AS, Garofalo RP, et al (2019). Cigarette Smoke Condensate Exposure Changes RNA Content of Extracellular Vesicles Released from Small Airway Epithelial Cells. Cells 17;8(12).
▌FAQ
問：有沒有操作視頻可參考？
答：請查閱10分鐘學會使用SEC方法進行外泌體分離：【外泌體研究】十分鐘get外泌體提取方法！
問：不同型號的Exo-spin試劑盒如何選擇？
答：按照血清的起始樣本量以及血清樣本數量選擇。
a、血清樣本量為100 µL，可選擇EX03(分別有8,24,50個SEC柱子的試劑盒)、EX07(Exo-spin 96,96個SEC柱子)
b、血清樣本量為150 µL，可選擇EX05(分別有5,20個SEC柱子的試劑盒)
c、血清樣本量為500 µL以內，可選擇EX02(分別有8,24,50個SEC柱子的試劑盒并含沉淀劑)、EX07(Exo-spin 96,96個SEC柱子，需另外搭配沉淀劑)
d、血清樣本量為1 mL，可選擇EX04(分別有5,20個SEC柱子的試劑盒，需另外搭配沉淀劑)
問：提取的外泌體怎么保存？
答：短期保存（一周內）置于4℃即可，長期保存請放置于-80℃
問：如何確定提取得到的是外泌體？
答：根據國際細胞外囊泡協會發表的指導手冊《MISEV 2018》，外泌體特征鑒定通過NTA測粒徑分布、TEM電鏡分析形態、WB檢測標志蛋白三項來驗證。NTA分析樣品中外泌體的粒徑分布和顆粒濃度，TEM電子顯微鏡來觀察樣品中外泌體的形態特征，WB檢測外泌體標志蛋白。
如何從上清液中提取外泌體請查閱：【外泌體提取純化】常見問題大合集 | 細胞上清
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