蛋白濃縮小幫手，PALL超濾方案選擇指南

一提起蛋白質(zhì)濃縮、更換緩沖液，我們都會想起超濾。這是一種我們都很熟悉的膜分離技術。它可用來分離溶液中極小的顆粒和溶解的分子。這種方法的最大特點是操作簡便，只需要濃縮離心管和離心機，即可圓滿完成我們的任務。

與層析、透析等方法相比，超濾對被處理的分子更加溫和。它不需要有機萃取，就不會導致蛋白變性。這種方法非常高效，可同時濃縮和純化分子。操作可在低溫（比如冷庫）下進行。另外，快速、便宜，也是許多人青睞它的原因。

濃縮離心管的操作很簡單。選擇適當?shù)臐饪s離心管，加入待處理的樣本，按照離心管的指示進行離心操作，最后回收截留的樣本。在離心力的作用下，溶液中的小分子溶質(zhì)和溶劑透過超濾膜，被收集在濾過液收集瓶中，而大分子溶質(zhì)被超濾膜截留在濃縮離心管中。這種分離的主要依據(jù)是分子大小，但分子形狀和電荷等其他因素也會有影響。

一般來說，超濾的回收率可達90%以上。樣本損失大多是由于濾膜表面和容器表面的非特異性吸附引起的。因此，選擇口碑好、高品質(zhì)的濃縮離心管非常重要。PALL作為全球領先的過濾企業(yè)，提供了多種濃縮離心管，可對50 μl到60 ml的樣本進行高效的濃縮和脫鹽。它配備了Omega（改良的聚醚砜）膜，確保低的非特異性吸附和高的回收率。當然，這個的前提是你選對了濃縮離心管。

▍按體積

PALL實驗室提供了4個系列的濃縮離心管，適合處理不同體積的樣本。你可以根據(jù)你的樣本量來選擇。不過，如果樣本濃度低體積大，可以選擇較小容積的濃縮離心管多次重復加樣離心。

▍選擇適當?shù)慕亓舴肿恿浚∕WCO）

一旦樣本體積確定，下一步就是選擇適當?shù)腗WCO。對于蛋白質(zhì)而言，建議所選濾膜的MWCO是欲截留分子大小的1/6-1/3。通常，截留孔徑越小，流速越慢，但截留比例更大。因此，如果流速是主要的考慮因素，建議選擇MWCO為1/3的濾膜；如果重點考慮截留比例，那么最好選擇更致密的膜。

友情提示一下，超濾膜對分子的截留是由多個因素決定的。在截留分子量之外，你還有必要考慮分子形狀、電荷、樣本濃度、樣本組成及操作條件。也許，線性的DNA分子溜走了，而球狀的分子卻被保留下來。總之，根據(jù)下表來選擇MWCO就基本沒錯了。為了防止大家拿錯管子，PALL實驗室還貼心地將不同MWCO的濃縮離心管設置成不同的顏色，以方便識別。

核酸應用的MWCO選擇

蛋白應用的MWCO選擇

病毒應用的MWCO選擇

對于1L樣品處理，切向流超濾系統(tǒng)會助力您的研究。PALL實驗室Minimate EVO 切向流超濾系統(tǒng)是設計用來進行高度可靠的1L樣品換液或者濃縮。新的切向流超濾系統(tǒng)增加了下游的壓力表來使計算跨膜壓力成為可能, 允許更大的用戶控制和驗證. 除此之外，Minimate EVO 切向流系統(tǒng)升級了磁力攪拌功能，更加堅固的管路和連接，更加容易安裝和運行。

▍濃縮

這是大家都很熟悉的應用。超濾可很方便地濃縮經(jīng)過稀釋的蛋白質(zhì)或DNA/RNA樣本。它很溫和，不會打斷長達100 kb的DNA，也不會導致蛋白酶活的損失，同時也很高效，回收率通常高于90%。通過膜預處理（鈍化）可以提高低濃度蛋白的濃縮效率。稀釋蛋白質(zhì)溶液的濃縮是一種廣泛使用的應用。 稀釋 (<10 µg/mL) 蛋白質(zhì)溶液的回收率通常不是定量的。在濃縮稀蛋白質(zhì)溶液之前對設備進行預處理（鈍化）可以提高回收率。

▍脫鹽和緩沖液交換

超濾帶來了一種方便而高效的方法，可去除和交換溶液中的鹽、去除變性劑、分離復合分子、去除低分子量組分，或者快速改變離子或者pH環(huán)境。比如在用兩種或兩種以上的限制性內(nèi)切酶進行酶切時，有時找不到通用的酶切緩沖液，就可以借助濃縮離心管，更換緩沖液。

▍組分分離

當然，超濾無法完全分離兩種分子量接近的分子。為了有效分離，待分離分子的分子量至少要相差一個數(shù)量級（10X）。對于PCR產(chǎn)物的純化和回收，超濾就很適合。PCR反應混合物里含有多種鹽、游離的核酸、甘油、蛋白和引物，因此大多數(shù)的下游應用都要求對PCR產(chǎn)物進行某種純化。超濾的方法快速，操作少，產(chǎn)率高，也不損傷DNA。

最后提醒一下，對于高通量超濾應用，PALL實驗室還提供各種微孔濾板助力您的研究。為您的科研保駕護航。歡迎聯(lián)系PALL實驗室索取免費樣品和下載技術資料。