細胞培養(yǎng)的介紹與基本流程
百趣代謝組學實驗室分享：細胞培養(yǎng)也叫細胞克隆術(shù)。是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境（無菌、適宜溫度、酸堿度和一定的營養(yǎng)條件等），使細胞生存、生長、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。小趣剛剛接觸細胞的時候很慌，每天小心翼翼，生怕哪天它一不高興就給我“臉色”看。經(jīng)過多年摸爬滾打，小趣終于成長為一名合格的細胞培養(yǎng)技術(shù)員，哈哈！今天，就和大家來聊一聊細胞培養(yǎng)的基本流程。
細胞培養(yǎng)主要涉及細胞的復蘇、傳代、凍存3個基本流程。其次才是相關(guān)的代謝組學細胞實驗（細胞轉(zhuǎn)染、增殖、凋亡、周期、免疫熒光等等），要知道良好的細胞狀態(tài)才是做好實驗的基礎(chǔ)。
01細胞復蘇
細胞從哪里來呢？一般細胞株的話從專業(yè)的細胞庫購買就可以。原代細胞需要從組織進行分離，且原代細胞分離后傳代次數(shù)非常有限，僅僅幾代狀態(tài)就開始下滑。細胞復蘇之前的準備工作至關(guān)重要。培養(yǎng)箱、超凈臺、槍頭進行消毒、滅菌處理（小趣使用的是一款可以高溫滅菌的培養(yǎng)箱，輕松了很多）。針對細胞準備特定的培養(yǎng)基以及高品質(zhì)的胎牛血清、雙抗；此外就是細胞的“家”了！大家一定注意可不能使用劣質(zhì)的培養(yǎng)皿/瓶，否則貼壁類的細胞不貼壁。細胞復蘇的基本流程已給大家梳理好了。
02細胞傳代
細胞復蘇工作完成后，就靜待細胞慢慢成長吧，細胞在生長的過程中會消耗營養(yǎng)，產(chǎn)生代謝物，培養(yǎng)液pH會發(fā)生變化。因此，建議48h左右進行換液，當培養(yǎng)板里的細胞密度達到90%左右就可以準備傳代了。
貼壁細胞常用胰酶消化法。先棄掉上清，用PBS漂洗一次后加入適量的胰酶消化液，剛好覆蓋細胞即可。不同細胞的消化時間不同，需要去摸索，第一次操作，可在鏡下多觀察幾次，當細胞與細胞之間間隙明顯，形態(tài)有變圓的趨勢時最理想（FTC133消化2 min、Hcclm3消化5min）。胰酶消化完成，加入培養(yǎng)基中和胰酶，輕輕吹打收集細胞至離心管，離心去除上清。再次加入新鮮培養(yǎng)基重懸細胞，按照1:1-1:6的比例分到多個培養(yǎng)皿中，補充培養(yǎng)液后放入培養(yǎng)箱即可。
03細胞凍存
細胞凍存是重中之重，新的細胞一定要進行凍存保種，防止后續(xù)細胞傳代次數(shù)過多、狀態(tài)差、污染等問題出現(xiàn)時無細胞可用。細胞凍存與傳代步驟有相同之處，不同的是消化收集細胞后使用凍存液（90%血清+10%DMSO）重懸細胞，然后分裝進凍存管中，轉(zhuǎn)移至凍存盒，-80℃過夜后即可轉(zhuǎn)入液氮長期保存。
細胞的培養(yǎng)過程其實也沒有你想象的那么難，把握好細節(jié)，離成功就不遠了。另外，小趣也總結(jié)了一些經(jīng)驗供大家參考學習。如果您有這方面的需求，我們也提供細胞相關(guān)的技術(shù)服務(wù)。
無菌意識一定要強。試劑、耗材必須無菌，操作前、后超凈臺滅菌處理
根據(jù)不同細胞特性使用不同的培養(yǎng)液，不建議與別人共用同一瓶試劑
培養(yǎng)多種細胞，操作時避免交叉污染
細胞操作時、打開培養(yǎng)箱取、放細胞時盡可能不要說話
文/阿趣代謝組學
01細胞復蘇
細胞從哪里來呢？一般細胞株的話從專業(yè)的細胞庫購買就可以。原代細胞需要從組織進行分離，且原代細胞分離后傳代次數(shù)非常有限，僅僅幾代狀態(tài)就開始下滑。細胞復蘇之前的準備工作至關(guān)重要。培養(yǎng)箱、超凈臺、槍頭進行消毒、滅菌處理（小趣使用的是一款可以高溫滅菌的培養(yǎng)箱，輕松了很多）。針對細胞準備特定的培養(yǎng)基以及高品質(zhì)的胎牛血清、雙抗；此外就是細胞的“家”了！大家一定注意可不能使用劣質(zhì)的培養(yǎng)皿/瓶，否則貼壁類的細胞不貼壁。細胞復蘇的基本流程已給大家梳理好了。
02細胞傳代
細胞復蘇工作完成后，就靜待細胞慢慢成長吧，細胞在生長的過程中會消耗營養(yǎng)，產(chǎn)生代謝物，培養(yǎng)液pH會發(fā)生變化。因此，建議48h左右進行換液，當培養(yǎng)板里的細胞密度達到90%左右就可以準備傳代了。
貼壁細胞常用胰酶消化法。先棄掉上清，用PBS漂洗一次后加入適量的胰酶消化液，剛好覆蓋細胞即可。不同細胞的消化時間不同，需要去摸索，第一次操作，可在鏡下多觀察幾次，當細胞與細胞之間間隙明顯，形態(tài)有變圓的趨勢時最理想（FTC133消化2 min、Hcclm3消化5min）。胰酶消化完成，加入培養(yǎng)基中和胰酶，輕輕吹打收集細胞至離心管，離心去除上清。再次加入新鮮培養(yǎng)基重懸細胞，按照1:1-1:6的比例分到多個培養(yǎng)皿中，補充培養(yǎng)液后放入培養(yǎng)箱即可。
03細胞凍存
細胞凍存是重中之重，新的細胞一定要進行凍存保種，防止后續(xù)細胞傳代次數(shù)過多、狀態(tài)差、污染等問題出現(xiàn)時無細胞可用。細胞凍存與傳代步驟有相同之處，不同的是消化收集細胞后使用凍存液（90%血清+10%DMSO）重懸細胞，然后分裝進凍存管中，轉(zhuǎn)移至凍存盒，-80℃過夜后即可轉(zhuǎn)入液氮長期保存。
無菌意識一定要強。試劑、耗材必須無菌，操作前、后超凈臺滅菌處理
根據(jù)不同細胞特性使用不同的培養(yǎng)液，不建議與別人共用同一瓶試劑
培養(yǎng)多種細胞，操作時避免交叉污染
細胞操作時、打開培養(yǎng)箱取、放細胞時盡可能不要說話
文/阿趣代謝組學
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