顯微鏡是生物實(shí)驗(yàn)室中必備的設(shè)備，但顯微鏡的類型和配置眾多，需求和配置如何相互對(duì)應(yīng)？又該如何去選擇適合自己實(shí)驗(yàn)室的顯微鏡？讓我們跟隨深藍(lán)云一起，看看顯微拍攝的設(shè)備需求吧。
 

問題1:我經(jīng)常需要觀察細(xì)胞，應(yīng)該用什么樣的顯微鏡？
 

回答：細(xì)胞種類眾多，但是大多數(shù)活細(xì)胞觀察時(shí)都是未染色細(xì)胞。未染色的細(xì)胞為透明狀態(tài)，普通明場(chǎng)顯微鏡觀察不到，這種情況下，需要使用相差的觀察方式。相差模式將光波通過細(xì)胞折射率和厚度不同的各部細(xì)微結(jié)構(gòu)產(chǎn)生的相位變化變?yōu)檎穹�差來觀察活細(xì)胞和未染色的標(biāo)本。
 

問題2：我們課題組即需要對(duì)病理切片進(jìn)行觀察，也需要對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行觀察，這兩種方式需要什么樣的設(shè)備？
 

回答：切片類型的樣本建議采用正置觀察方式，即物鏡位于載物臺(tái)上部，而細(xì)胞一般放置于培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿中，所需要的空間更大，更適合使用倒置觀察方式。因此對(duì)常規(guī)顯微鏡就需要一臺(tái)正置顯微鏡、一臺(tái)倒置顯微鏡。不過ECHO正倒置一體顯微鏡，既可以正置也可以倒置，一臺(tái)就可以滿足兩種需求啦。
 

問題3：既需要明場(chǎng)拍攝也需要熒光拍攝需要怎么選？
 

回答：

▲熒光產(chǎn)生原理圖

▲ 熒光光路示意圖
 

單色相機(jī)擁有更高的靈敏度以及光通量，而彩色相機(jī)擁有更好的對(duì)比度和色彩還原能力。熒光觀察時(shí)需要用特定波長(zhǎng)的激發(fā)光激發(fā)材料產(chǎn)生熒光，并通過濾色片最終得到特定波長(zhǎng)的熒光，而這種熒光一般較弱，觀察時(shí)需要高靈敏度的相機(jī)，因此配置采用單色相機(jī)。單色相機(jī)無法識(shí)別真實(shí)顏色，不適合進(jìn)行明場(chǎng)拍攝，因?yàn)槊鲌?chǎng)拍攝需要更好的對(duì)比度，彩色相機(jī)才可以滿足此需求。如果想獲得最好的熒光與明場(chǎng)觀察效果，最佳的選擇是搭配雙相機(jī)系統(tǒng)。
 

 

這里說一下哦，ECHO正倒置一體顯微鏡突破了常規(guī)顯微鏡的設(shè)計(jì)，同時(shí)配置了雙相機(jī)系統(tǒng)，自動(dòng)切換，保證無論明場(chǎng)還是熒光都可以獲得最佳的觀察效果，同時(shí)滿足您的多種需求。
 

問題4：市面上熒光顯微鏡的光源多種多樣，我該選擇哪種？

 

回答：大多數(shù)熒光顯微鏡的光源波長(zhǎng)需求都在可見光范圍內(nèi)，在這個(gè)范圍內(nèi)，LED光源要明顯優(yōu)于其他光源，其在不同波長(zhǎng)范圍可以做到光強(qiáng)一致，且壽命更長(zhǎng)，無需預(yù)熱和冷卻，作為冷光源，其可以做到隨開隨用，且光毒性低，適合大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室配置。
 

問題5：可供選擇的熒光通道那么多，我該如何選擇熒光通道？

回答：對(duì)于熒光通道的選擇，需要根據(jù)用戶想要觀察的熒光波長(zhǎng)來進(jìn)行確定，如用戶后續(xù)需要DAPI染色，需要進(jìn)行GFP蛋白的觀察，這些觀察都有其對(duì)應(yīng)的熒光波長(zhǎng)范圍，符合該波長(zhǎng)范圍的熒光通道就可以選擇，如DAPI通道，F(xiàn)ITC通道。
 

問題6：物鏡該如何選擇？熒光觀察配置什么物鏡？

回答：

▲ 物鏡

物鏡的分類方式很多，這里先說一個(gè)根據(jù)色差校正進(jìn)行的分類，色差校正能力由高到低分別是復(fù)消色差顯微鏡，半復(fù)消色差顯微鏡（螢石物鏡），消色差物鏡，消色差能力越強(qiáng)，帶來的最直觀提升是NA值越高，因此分辨率更好。半復(fù)消色差物鏡的校正范圍為400-500，是常見熒光發(fā)射光的波段，適合進(jìn)行熒光觀察，因此對(duì)于熒光顯微鏡，一般配置半復(fù)消色差物鏡。

以上是一些關(guān)于如何選擇和配置顯微鏡的常見問題，后續(xù)我們還會(huì)更新一些更加深入的信息。

部分圖源：來自網(wǎng)絡(luò)，侵刪。