細胞因子6（IL-6）檢測試劑盒使用說明
IL-6是一種分子量為21~26 kDa的糖蛋白，其來源主要是單核-吞噬細胞，也可由其他細胞產生，有多種調節作用，是機體細胞因子網絡中的重要成員，除參與機體的炎癥反應和抗感染防御機制外，還與自身免疫疾病和某些腫瘤的發生和轉歸密切相關，正常人血清中IL-6的平均含量低于10pg/ml，而當患有某些疾病時，如類風濕性關節炎、燒傷、腎臟移植排斥反應、敗血癥休克，心臟粘液瘤、肝炎、全身性紅斑狼瘡、何杰金氏病以及某些腫瘤疾病，體液中的IL-6水平有不同程度升高，在許多情況下與病程和病情相平行。在有些疾病中，如愛滋病，血清中IL-6的水平與sIL-2R之間存在明顯相關性。因此，檢測血清、血漿及其他體液中IL-6的水平，不僅可以輔助臨床某些疾病的診斷，也可以對病情，預后及療效進行評估。我們在制備了抗rHuIL-6單克隆抗體的基礎上，建立了檢測IL-6的夾心ELISA，敏感性可達100pg/ml。
原理：
采用兩株識別不同表位的抗IL-6單克隆抗體，其中一株作為包被抗體，以識別和結合待檢標本中的IL-6，另一株作為酶標抗體，與結合于包被抗體的IL-6的另一表位結合，并催化底物顯色，根據標準品OD值繪制標準曲線，在標準曲線上查出待檢標本中IL-6的含量。
操作步驟：
- 將試劑盒平衡至室溫后取出反應板拆封后于板架上。
- 將標準品用標準品稀釋液作1：5稀釋，然后依次使用標準品稀釋液作1：1梯度稀釋（對倍梯度稀釋）成7個不同濃度的標準品。
- 加待檢標本：加待檢樣品、陰性對照及標準品，100μl/孔，37℃，1h。（8個不同濃度的標準品按濃度由高至低依次加入）。
- 加酶標抗體：洗板3次，加入酶標抗體
10０μl/孔，37℃，1h。
5. 顯色：洗板3次，加入顯色劑Ａ，Ｂ液各１滴，37℃顯色10min。
結果判斷：
1．目測：在白色背景下觀察各孔顯色情況，蘭色者為陽性，無色者為陰性。
2．酶標儀測定：每孔加終止液一滴，混勻后在4５0nm下測定各孔O.D值。根據標準品OD值繪制標準曲線，在標準曲線上查出待檢標本中IL-6的含量。
注意事項：
1．孔板須密封防潮，從冷藏環境中取出時，應置室溫平衡至潮氣盡干后方可開啟使用，余者封存置2-8℃。
2．滴加試劑前應將液體翻轉數次混勻，滴加時保持瓶身垂直。
3．洗滌時每孔均須加滿，防止孔內有游離酶不能洗凈。
4．試劑置2-8℃存放，不能凍結，有效期10個月。
5．細胞培養上清、血清、杞櫞酸鹽或EDTA抗凝血漿均可檢測。血清或血漿中殘存凝塊或紅細胞須經離心去除，勿用溶血或脂肪過多的血清。標本在2~8℃可貯存3天，超過3天應放入－20℃或－70℃，避免反復凍融。
