九叔归来3魁蛊婴在线观看_男人躁女人到高潮AV_香港成人论坛_亚洲精品久久久久久偷窥_夜来香成人网_亚洲制服 视频在线观看_无毒黄站_国产传媒18精品A片一区_麻花豆传媒剧国产MV在线观看_东北60岁熟女露脸在线_国产高清视频在线观看97_一道本视频一二三区_yellow免费播放在线观看_浪漫樱花动漫在线观看官网_高清AV熟女一区_天堂在线www_亚洲第一成年人网站_黄色在线免费观看_av女优快播_久久精品99国产精品日本

English | 中文版 | 手機版 企業登錄 | 個人登錄 | 郵件訂閱
當前位置 > 首頁 > 技術文章 > 基因擴增PCR的擴增與克隆方法及一些使用的小建議

基因擴增PCR的擴增與克隆方法及一些使用的小建議

瀏覽次數:3502 發布日期:2020-11-24  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

基因擴增PCR主要有冰箱、超凈臺、加樣器、混勻器、天平等。加樣器、天平除了要專用外,還應有定期校準。試劑分裝應在超凈臺中進行,擴增反應混合液應使用分子生物學級的,試劑制備好后應有質檢:一是否有污染、二是檢測試劑的擴增效果。
 

基因擴增PCR的擴增與克隆方法:

  ①引物的序列應位于基因組DNA的高度保守區,且與非擴增區無同源序列。這樣可以減少引物與基因組的非特異性結合,提高反應的特異性

 

  ②引物長度:15-40bp為宜。引物過短或過長均可使反應的特異性下降。

 

  ③引物的堿基盡可能隨機發布,避免出現數個嘌呤或嘧啶的連續排列,G+C堿基的含量在40%-75%之間。

 

  ④引物內部應避免形成二級結構,特別是引物的末端應避免有回文結構。

 

  ⑤二個引物不應有互補序列,特別是3’端應避免互補,以免形成“引物二聚體”,浪費引物。

 

  ⑥引物5’末端堿基無嚴格限制,在與模板DNA結合的引物長度足夠的條件下,其5’端堿基可不與模板DNA互補而呈游離狀態,因此可在引物5’端加上限制性內切酶位點、啟動子序列或其它序列等以便于PCR產物的分析克隆等,引物的5’端至多可加10個堿基而對PCR反應無影響。

  基因擴增PCR的使用建議:

  1、使用本制品時務必將Buffer反復混勻后再加,避免因組分不一導致結果差異;

 

  2、配置和分裝反應液時請一定使用新的(無污染的)噴頭以避免污染;

 

  3、如擴增條帶多,可適當添加酶和dNTPs;

 

  4、當多重PCR擴增產物的長度均在1kb以內時,使用3%~4%濃度的Agarosegel進行電泳分離效果。

發布者:上海寶予德科學儀器有限公司
聯系電話:4008216837
E-mail:jiezhen.shen@bio-dl.com

用戶名: 密碼: 匿名 快速注冊 忘記密碼
評論只代表網友觀點,不代表本站觀點。 請輸入驗證碼: 8795
Copyright(C) 1998-2025 生物器材網 電話:021-64166852;13621656896 E-mail:info@bio-equip.com
主站蜘蛛池模板: 灌南县| 五寨县| 南阳市| 汨罗市| 阳山县| 荣成市| 额济纳旗| 南昌县| 新民市| 建水县| 光泽县| 冀州市| 黔江区| 高邮市| 平凉市| 兖州市| 侯马市| 岑溪市| 邢台市| 沈丘县| 花莲县| 华安县| 横山县| 金寨县| 小金县| 榆社县| 宝丰县| 明星| 夏津县| 定边县| 保德县| 高密市| 巧家县| 武安市| 华安县| 阳山县| 平凉市| 肥乡县| 辽阳市| 横峰县| 邓州市|