基于細菌外膜囊泡的H1N1/冠狀病毒雙聯疫苗的制備

瀏覽次數：1870　發布日期：2020-3-20　來源：本站　僅供參考，謝絕轉載，否則責任自負

基于細菌外膜囊泡的H1N1/冠狀病毒雙聯疫苗的制備

來自德國吉森大學等的科學家們在2019年第7期的《Vaccines》雜志上發表了題為“Bacterial Outer Membrane Vesicles (OMVs)-Based Dual Vaccine for Influenza A H1N1 Virus and MERS-CoV”的文章。文中，研究人員開發了一種基于細菌外膜囊泡（OMV）的疫苗，其可遞呈甲型流行性流感病毒（H1N1）2009株（H1N1pdm09）H1型血凝素（HA）和中東呼吸道綜合征冠狀病毒（MERS-CoV）受體結合結構域（RBD）的抗原性穩定嵌合融合蛋白，縮寫為OMVs-H1/RBD。研究結果表明，嵌合抗原可誘導對抗兩種毒株的特異性中和抗體，免疫的小鼠可形成針對H1N1pdm09的保護，并有效中和MERS-CoV。所以，可認為，遞呈病毒性抗原的OMV疫苗是一種對抗兩種不同病毒感染的安全、可靠的方法。

實驗操作中，E.Coli DH10β菌轉染pMP-H1/RBD質粒，LB瓊脂糖平板克隆篩選，接種至5mL 液體LB，培養16h，然后培養液接種至大體積培養。

OMV通常從轉染的E.Coli DH10β細胞的上清液純化。操作時，2L的DH10β培養液于37℃ LB肉湯中搖瓶培養，直到對數生長期（OD600nm 1.0）。生產的細菌離心，上清液使用0.22μm過濾器過濾，去除殘留的菌體。之后，無細菌的上清液用KrosFlo KR2i 切向流過濾系統及100kD中空纖維膜超濾濃縮至終體積30mL。獲得濃縮液進一步4℃ 150,000xg超速離心3h，分離OMV餾分。之后，含有OMV的沉淀重懸于300μL PBS，除菌過濾，并于-80℃儲存。

為對含有嵌合HA/RBD抗原的OMV進行鑒定，使用免疫印跡分析確定OMV中存在MERS-CoV的RBD和H1N1pdm09的H1-HA，并確認存在連接RBD的HA病毒蛋白，其分子量與HA0-RBD之和相當。

原文：M.M.Shehata, A.Mostafa, L.Teubner, et al., Bacterial Outer Membrane Vesicles (OMVs)-Based Dual Vaccine for Influenza A H1N1 Virus and MERS-CoV. Vaccines, 2019, 7(46), doi:10.3390/vaccines7020046.