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如何使用KeyPro污染凈化儀防止RNA的降解和保證PCR的結果準確性

瀏覽次數:2471 發布日期:2020-2-19  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

在此次的新型冠狀病毒疫情中,核酸檢測作為確診的金標準發揮著重要的作用。眾所周知,本次新冠病毒的核酸檢測流程為采樣(咽拭子、肺泡灌洗液),提取病毒RNA,再經過RT-qPCR或者一步法RT-數字PCR檢測樣本。但近期關于核酸檢測準確性的討論也甚囂塵上,其中PCR實驗污染是導致實驗有偏差的原因之一, 造成PCR實驗污染的主要原因有以下幾點,樣本間交叉污染(樣本泄漏引起的交叉,樣本提取過程中移液器、耗材的污染),PCR試劑的污染(容器、耗材、移液器,水等被污染),PCR擴增產物污染,氣溶膠污染,克隆質粒污染等。

在病毒核酸檢測過程中,結果的準確性除了檢測方式的靈敏度很重要以外,保證提取RNA樣本的完整性也十分重要。今天我們就聊聊如何防止RNA降解,獲得高質量的RNA進行后續試驗。導致RNA降解最主要的物質就是RNase,RNase非常穩定,且無處不在,用常規的高溫高壓蒸汽方法和蛋白酶抑制劑不能使所有的RNase完全失活。

RNase結構

除上述方法外,研究人員最常用的就是使用DEPC等對實驗過程中使用的耗材和試劑進行處理,但DEPC處理時間長且有毒,下面給出遠離DEPC的三大理由:

1、DEPC 對人體有害,DEPC為高活性烷化試劑,能對蛋白質進行共價稀釋,使其組氨基團的乙氧基甲酸化(RNase 活性位點有兩個組氨基酸,故能被滅活);同時能使 RNA 分子中沒配對的腺嘌呤羥甲基化,改變其活性,嚴重時會影響 RNA 形成雜交雙鏈的能力,歸為強致癌物,使用時要十分小心。

2、不能處理一些試劑:例如:一級胺的試劑TRIS,PBS等,會發生化學反應;二是不能高壓滅菌的試劑,DTT,dNTP,Mgcl2,因為 DEPC必須通過高壓滅菌去除;三是不能用于PH低于4及以下的試劑,DEPC在此條件下對RNase沒有滅活作用。

3、DEPC不適合某些實驗,測OD值的實驗,OD讀數跟 PH 有關, DEPC 在溶液中分解后變成乙醇和二氧化碳,部分二氧化碳與水反應形成碳酸,導致 PH 降低,進而降低OD值。

 

實驗者迫切需要一種非常快速且方便的去除RNase的方法,保證結果的準確性。使用 KeyPro™KP100生物污染紫外凈化儀,通過275nm和365nm雙紫外的協同作用可在5min解除上述污染煩惱。免清洗,無化學殘留,方便快捷,適用于高保真 RNA 文庫制備,測序和 PCR 實驗室中的微孔板去污、移液器、水、金屬、陶瓷、塑料、玻璃等表面RNase的滅活等。同時KeyPro™KP100還可以去除病毒和細菌等的污染,防止實驗用品導致的實驗結果和環境污染。

KeyPro™KP100 生物污染紫外凈化儀采用 SLM™專利技術將 LED 陣列,光學元件和熱冷卻技術集于一身,可最大限度地提高消毒和去污性能,為您節省寶貴的科研時間。

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1. 5min 完全滅活污染物

2. 觸屏操作,簡單易用

3. 快速,通量高

4. 穩定,一致的效果

5. 降低實驗室耗材成本

6. 工作流程集成化

發布者:艾普拜生物科技(蘇州)有限公司
聯系電話:0512--86860010
E-mail:info@aperbio.com

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