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宿主殘留蛋白HCP ELISA抗體覆蓋率檢測(cè)的應(yīng)用

瀏覽次數(shù):5027 發(fā)布日期:2019-11-1  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
現(xiàn)今許多生物藥物(抗體、疫苗、重組蛋白等)的制備還是通過(guò)生物體系合成,諸如非洲綠猴腎細(xì)胞(Vero細(xì)胞)和中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞,大腸桿菌等,這些細(xì)胞稱(chēng)為宿主細(xì)胞。盡管已經(jīng)采用多種純化方式,但是在生物藥物中還是可能會(huì)有微量的宿主蛋白殘留(HCP)。由于HCP殘留可能對(duì)生物藥物的安全性和藥效性能產(chǎn)生一定影響,因此,精準(zhǔn)的HCP檢測(cè)對(duì)于控制生物藥物的質(zhì)量和安全尤為重要。如:
目前,檢測(cè)HCP應(yīng)用最廣泛、最有實(shí)用價(jià)值的方法就是采用ELISA方法,它檢測(cè)的是總HCP組分,重復(fù)性好,靈敏度高,便于設(shè)定檢測(cè)限度和建立技術(shù)規(guī)范。但是ELISA方法檢測(cè)也有一定的局限性,比如HCP成分不一,每一種蛋白成分含量也不一致,作為免疫原產(chǎn)生抗體的能力也不相同,所以由此制備的抗HCP抗體并不能完全檢測(cè)HCP中所有成分,因此會(huì)有“漏檢”,所以需要評(píng)估HCP ELISA抗體的覆蓋率(Coverage)。
HCP ELISA抗體覆蓋率的評(píng)估方法一般會(huì)采用雙向電泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)和蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot,WB)技術(shù)結(jié)合的辦法。將分別得到的HCP總蛋白分離圖像和HCP抗體結(jié)合的圖像放在一起疊加、匹配膠點(diǎn)、分別記錄匹配和未匹配的膠點(diǎn)數(shù)量,計(jì)算覆蓋率結(jié)果。現(xiàn)在還會(huì)使用2D-DIGE技術(shù)進(jìn)行HCP抗體覆蓋率的檢測(cè),例如使用cy3標(biāo)記總蛋白,使用cy5標(biāo)記的anti-HCP的二抗,這樣最后可以最后一起檢測(cè),不用跑兩塊膠,節(jié)省時(shí)間和試劑花費(fèi)成本等。
美國(guó)Azure公司的 Sapphire™ 雙模式多光譜激光成像系統(tǒng),專(zhuān)業(yè)技術(shù),帶來(lái)高質(zhì)量檢測(cè)結(jié)果。配有四激光,RGB三色激光即可進(jìn)行2D和2D-DIGE的檢測(cè),大平臺(tái),檢測(cè)更順暢,儀器可進(jìn)行分辨率,激光強(qiáng)度,聚焦深度的設(shè)置,特別是聚焦,采用激光共聚焦光路,減少樣品表面灰塵等的干擾,提高信噪比,檢測(cè)更靈敏。
除了上面的應(yīng)用,sapphire還可檢測(cè)多種樣品類(lèi)型-包括膜/PAGE膠/同位素標(biāo)記樣品/瓊脂糖凝膠/培養(yǎng)皿/96孔板/微陣列芯片/組織切片等等。
發(fā)布者:艾普拜生物科技(蘇州)有限公司
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