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X-Gluc——擬南芥GUS染色

瀏覽次數:10479 發布日期:2019-9-11  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
該產品是檢測大腸桿菌中uidA基因(β-葡萄糖苷酶基因β-glucuronidase, GUS)的底物。Gus 基因作為一種報告基因,在植物遺傳轉化研究中有廣泛的用途。Gus基因來自于大腸桿菌,編碼β-葡聚糖苷酶(一種水解酶),可催化底物5-溴-4-氯-3-吲哚葡聚糖醛酸苷(5-bromo-4-chloro-3-indolyl-glucronide,縮寫為X-Gluc)分解,產生肉眼可見的深藍色化合物,借此用來觀察轉基因植物中外源基因的表達情況,鑒定轉基因植株。
本品以X-GLUC的環已胺鹽形式提供。CAS 114162-64-0,達到分子生物學和植物轉化研究級別。粉末形式提供,可溶于DMF配置20mg/ml儲存液中,低速渦旋充分溶解,避光低溫保存。


GUS染色步驟:
1.取材:將葉片、花瓣、根莖等組織剪成小片,放于1.5ml離心管中。
注:用于染色的植物材料的制備方法要因涉及的特定組織和器官的不同而異。例如,擬南芥的根、花和葉片以及煙草幼苗的根就可以不作任何預處理而直接染色。但是像煙草和馬鈴薯這些植物的莖和葉就必須在染色前切成薄片(1-3mm)。當操作大的組織和樣品時,可以選用真空滲入法來幫助底物滲入細胞。
2.染色:加入適量配制好的GUS染色工作液至完全覆蓋材料;錫箔紙包好后搖床搖動10分鐘或更長時間至材料出現藍色。注意要做陰性和陽性對照實驗。
3.洗脫:將材料轉入無水乙醇或80%丙酮中脫色2-3次,至陰性對照材料為白色。GUS染色陽性的藍色斑點很穩定,在酒精中不褪色。
4.觀察:一般染色后,GUS染色陽性的藍色斑點肉眼就能看到。但是有些材料可能藍色斑點很細微,要在顯微鏡下才能看到。
http://www.warbio.cn/rczp/show-1080.html
發布者:南京沃博生物科技有限公司
聯系電話:15852927017
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