原代細胞培養中常遇到的誤區

原代細胞（primary culture cell）是指從機體取出后立即培養的細胞。有人把培養的第1代細胞與傳10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。原代細胞不僅廣泛應用于分子、細胞生物學和生物醫學基礎研究，如蛋白質組學、基因組學、細胞株（系）研究、DNA，RNA和遺傳學研究等，還可應用于當今熱門的生物醫藥產業如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、癌癥藥物的研究等。原代細胞在生物醫藥領域有不可替代性作用，市場前景廣闊。

原代細胞的培養是指直接從機體取下細胞、組織和器官后立即進行培養。因此，較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養，此時的細胞保持原有細胞的基本性質，如果是正常細胞，仍然保留二倍體數。但實際上，通常把第一代至第十代以內的培養細胞統稱為原代細胞培養。
下面由小編幫大家糾正一下原代細胞培養中產生的問題。

錯誤1：一小管原代細胞在水浴中解凍一段時間

糾正1：原代細胞對解凍過程非常敏感，因此將小瓶置于37℃水浴鍋中，保持并輕輕旋轉直到內容物剛剛解凍是很重要的。然后應立即從水浴中取出小瓶，并轉移到無菌操作臺。確保您的培養瓶在解凍前已經準備就緒，以便可以立即用于接種細胞，并置于培養箱中。

錯誤2：解凍match小瓶后直接離心原代細胞

糾正2：我們不建議在解凍后離心細胞，因為離心程序比少量的DMSO殘留更有害。記住，在恢復原代細胞后的第二天更換培養基以去除任何殘留的DMSO。

錯誤3：允許原代細胞變得過于融合

糾正3：當生長至100％匯合時，原代細胞可以變得衰老。記住，原代細胞不是100％純，因此重要的是盡量減少污染細胞的生長。我們建議在細胞達到90-95％融合時，對原代細胞進行傳代培養。

錯誤4：傳代原代細胞時過度胰蛋白酶消化

糾正4：當細胞傳代時，使用低濃度的胰蛋白酶并在顯微鏡下密切監測細胞。此外，記得在胰蛋白酶消化后完全中和細胞中的胰酶，因為任何活性的胰蛋白酶都將損傷細胞。

錯誤5：原代細胞可以很容易地重新凍存

糾正5：通常我們不推薦重新凍存原代細胞，因為這可以促進細胞衰老和/或導致功能變化。原代細胞非常敏感，重新凍結可能導致細胞死亡或損傷。

錯誤6：原代細胞可以無限的增殖

糾正6：與細胞系不同，原代細胞具有有限的擴增能力。我們建議盡早使用原代細胞進行實驗以防止遺傳漂移。此外，如果你正在使用一個增值困難的細胞類型，你應該密切監測細胞形態，因為少量混雜的細胞（如成纖維細胞）可能隨著時間的推移，大量生長從而成為主要細胞。

北京百歐博偉生物技術有限公司的中國微生物菌種查詢網提供微生物菌種保藏、測序、購買等服務,是中國微生物菌種保藏中心的服務平臺，并且是集微生物菌種、菌種,ATCC菌種、細胞、培養基為一體的大型微生物查詢類網站，自設設備及技術的微生物菌種保藏中心！歡迎廣大客戶來詢！