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遠離噪音點:western blot封閉那些事

瀏覽次數:11118 發布日期:2018-11-6  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
Western blot封閉步驟為什么重要?
 
樣品從凝膠轉印到膜上后,在抗體孵育之前都要進行封閉的步驟。 了解封閉的工作原理可提高western blot的質量,提高數據的特異性,靈敏度和信噪比。
 
蛋白封閉液是如何工作的?
通用的PVDF膜和NC膜具有很強的蛋白結合能力,如果跳過封閉步驟,一抗或二抗可能非特異性地與膜結合,導致高背景或“噪音點”的印跡( 圖1)。 封閉緩沖液覆蓋或“封閉”這些非特異性蛋白結合位點,確保大部分一抗僅與靶蛋白結合(圖2)

如果選擇有效的封閉緩沖液,可以減少非特異性結合而不干擾抗體 - 抗原結合。


如何進行封閉液的選擇?
 選擇正確的封閉緩沖液取決于幾個因素,包括一抗的靶標和正在使用的檢測系統。 一些最常用的封閉緩沖液含有蛋白質封閉試劑。 蛋白封閉試劑可以是蛋白質混合物,例如脫脂奶粉或血清,或單一蛋白質,例如BSA。 脫脂奶粉是一種流行的封閉試劑,因為價格低廉且易于找到。 然而,牛奶含有磷蛋白,可能干擾抗磷酸化蛋白抗體western blot檢測。 牛奶還可以干擾基于生物素 - 鏈霉抗生物素蛋白的檢測系統。 在這些情況下,含有BSA的封閉緩沖液可能是優選者。 或者,為了避免抗體和蛋白封閉試劑之間潛在的交叉反應,可以使用無蛋白封閉試劑如PVP-40。
Azure Fluorescent Blot Blocking Buffer經過優化,配合Azure多功能成像系統和sapphire雙模式多光譜激光成像系統使用,可降低背景噪音和產生穩定熒光信號。
發布者:艾普拜生物科技(蘇州)有限公司
聯系電話:0512--86860010
E-mail:info@aperbio.com

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