D-熒光素鉀鹽及D-熒光素使用中的常見問題

瀏覽次數：9021　發布日期：2016-11-3　來源：本站　僅供參考，謝絕轉載，否則責任自負

1、D-熒光素適合做哪些實驗?

D-熒光素鉀鹽和5-氟-熒光素，作為Luciferase的作用底物，常用于以下實驗：
    1. 報告基因分析
    2. In vivo imaging (動物活體成像)
    3. In vitro imaging (細胞體外分析)
    4. ATP測定
    5. 其它luciferase及其基因相關的分析和研究工作

2、D-熒光素應用于活體成像的基本原理

細胞中D-熒光素酶參與的化學發光反應遵守酶促反應的基本原理，在底物D-熒光素鉀過量的情況下，反應產生的光子數（發光量）與細胞中的D-熒光素酶的量成正相關，從而可以推算出細胞的數量。

3、D-熒光素鉀鹽溶液的穩定性

D-熒光素鉀鹽易溶于水和緩沖液，溶解度可高達25mg/mL。一般使用濃度為3-15 mg/mL。

溶液的pH值、溶液中的氧氣和保存時間對其保存過程中的穩定性非常重要。當溶液的pH<6.5（發生水解作用）或>7.5（發生消旋化作用，D型轉化為L型）的情況下，D-熒光素鉀鹽相對不穩定。如果溶液中存在少量的氧氣，將加速D-熒光素鉀的降解速度。

D-熒光素配成溶液后，在最佳的保存條件（-80°C，最佳pH，無氧氣）下，存在固定的降解速度：0.2%/天，因此配成溶液保存的D-熒光素應盡量在1年內使用完。

有水存在的情況下，主要發生消旋化作用，即D-熒光素轉化成L-熒光素，有報道稱L-熒光素對熒光素酶催化的酶促反應有抑制作用。

4、D-熒光素、D-熒光素鈉和D-熒光素鉀之間的區別

主要區別在于溶解和分散性能。D-熒光素鉀鹽在水和緩沖液中的溶解度高，且溶解速度較快，故在一般的生物學試驗中常用D-熒光素鉀鹽。

5、D-熒光素鉀鹽的保存和運輸條件

保存條件：≤-20°C，避光，保持干燥。（在不打開包裝的條件下，可保存兩年時間）。

運輸條件：高純度的D-熒光素鉀鹽可在短時間內常溫條件下保存，運輸條件為常溫。