蛋白質(zhì)的分離純化是研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的重要手段，也是制備工業(yè)用酶、抗體、疫苗、基因重組藥物等的唯一途徑。蛋白純化的方法多種多樣。常用的有以下幾種方案：基于蛋白質(zhì)的溶解度不同設(shè)計(jì)的鹽析或等電點(diǎn)沉淀方法；基于蛋白質(zhì)分子量差異的透析與超濾或凝膠過濾方法；基于蛋白質(zhì)所帶電荷不同設(shè)計(jì)的等電聚焦電泳或離子交換層析方法；以及利用特異性配體與目的蛋白結(jié)合的親和層析法等等。相對核酸純化而言，不同蛋白質(zhì)的特性千差萬別，摸索純化條件往往是一項(xiàng)艱難而繁復(fù)的工作。

 

親和層析是利用生物分子間的親和吸附和解離而設(shè)計(jì)的層析方法，具有操作簡單、條件溫和、獲得的蛋白純度高等特點(diǎn)，特別適合于活性蛋白質(zhì)的純化，并且對表達(dá)量低的活性蛋白也具有良好的分離效果。常用的親和層析基質(zhì)包括：專門針對抗體的蛋白A或蛋白G親和基質(zhì)，針對生長因子和核酸結(jié)合蛋白的肝素型親和基質(zhì)，用于純化含有標(biāo)簽的融合蛋白親和基質(zhì)，以及結(jié)合了特異性抗體的親和基質(zhì)等。隨著基因重組表達(dá)技術(shù)的廣泛應(yīng)用，將目的蛋白與親和純化標(biāo)簽進(jìn)行融合表達(dá)，再通過親和層析法純化出目的蛋白，已成為實(shí)驗(yàn)室最常用的一項(xiàng)技術(shù)。

 

GenStar公司提供兩類瓊脂糖親和吸附基質(zhì)，用于親和層析柱的制備。一類為用于純化帶有His或GST標(biāo)簽的融合蛋白的金屬鎳基質(zhì)或GSH基質(zhì)；另一類為用于純化多種來源的抗體以及免疫復(fù)合物的蛋白A和蛋白G交聯(lián)瓊脂糖親和吸附基質(zhì)。由于蛋白A和蛋白G對于不同種屬或亞型的抗體吸附能力不同，請參照表6.1選用合適的純化基質(zhì)。當(dāng)無法判別抗體來源或亞型時(shí)，可采用蛋白A/G雙重交聯(lián)基質(zhì)，免去摸索純化條件所浪費(fèi)的時(shí)間和材料。