冷凍超薄切片原理和使用

瀏覽次數(shù)：5745　發(fā)布日期：2013-12-30　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

冷凍超薄切片技術(shù)是一種為了研究更接近于生物生活狀態(tài)結(jié)構(gòu)和功能而發(fā)展起來的電鏡樣品制備技術(shù)。它是把樣品進(jìn)行冷凍固定后，進(jìn)行超薄切片，省去了經(jīng)典超薄切片法的長時間的固定、脫水和也埋等處理。樣勵在切片前后，不經(jīng)過強(qiáng)烈的化學(xué)處理，約胞結(jié)構(gòu)能得到很好的保存；尤其是可溶性成分小會被抽提，使得電鏡圖像更接近于生物的生活狀態(tài)。可用于細(xì)胞免疫化學(xué)、可溶性成分自顯影、尤其在X射線微區(qū)成分分析等研究中。冷凍超薄切片機(jī)操作：在超薄切片機(jī)上加上高壓冷凍儀冷凍附件就可進(jìn)行。冷凍超薄切片的制備程序可為兩類：

1.無溶液制備法：包括取材、快速冷蹤、冷凍替代、切片、干燥、染色或不染色、鏡檢等幾個步驟。主要用于可溶性物質(zhì)的放射白顯影和X射線微區(qū)分析。

2.固定樣品制備法：包括取材、醛類闌定、樣品包埋或不包埋、冷凍保護(hù)處IR、快速冷凍切片、染包及鏡檢等步驟。適用于進(jìn)行形態(tài)學(xué)、細(xì)胞化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)研究。

用戶經(jīng)培訓(xùn)后取得資格可自行使用超薄切片機(jī)，使用步驟如下：

1）開機(jī)

2）檢查是否處于切片模式，檢查頂光底光是否亮度正常；

3）將包埋塊放入適當(dāng)夾頭并用六角扳手旋緊，以固定包埋塊；（然后將夾頭安裝在修快臺進(jìn)行修快）；

4）將夾頭放入機(jī)械臂，并用手旋好螺絲上緊夾頭（不可用六角扳手）；

5）將玻璃刀/鉆石刀安裝在刀臺上，用手旋好螺絲以固定刀，并注意檢查刀臺是否固定于底座上；

6）檢查刀間隙角，調(diào)整刀臺角，選擇適當(dāng)?shù)膴A頭角度等；

7）設(shè)定切片窗口（上下范圍）；

8）對刀；

9）選擇所用切片速度和厚度；