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冷凍超薄切片原理和使用

瀏覽次數(shù):5745 發(fā)布日期:2013-12-30  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
冷凍超薄切片技術(shù)是一種為了研究更接近于生物生活狀態(tài)結(jié)構(gòu)和功能而發(fā)展起來的電鏡樣品制備技術(shù)。它是把樣品進(jìn)行冷凍固定后,進(jìn)行超薄切片,省去了經(jīng)典超薄切片法的長時間的固定、脫水和也埋等處理。樣勵在切片前后,不經(jīng)過強(qiáng)烈的化學(xué)處理,約胞結(jié)構(gòu)能得到很好的保存;尤其是可溶性成分小會被抽提,使得電鏡圖像更接近于生物的生活狀態(tài)。可用于細(xì)胞免疫化學(xué)、可溶性成分自顯影、尤其在X射線微區(qū)成分分析等研究中。冷凍超薄切片機(jī)操作:在超薄切片機(jī)上加上高壓冷凍儀冷凍附件就可進(jìn)行。冷凍超薄切片的制備程序可為兩類:
1.無溶液制備法:包括取材、快速冷蹤、冷凍替代、切片、干燥、染色或不染色、鏡檢等幾個步驟。主要用于可溶性物質(zhì)的放射白顯影和X射線微區(qū)分析。
2.固定樣品制備法:包括取材、醛類闌定、樣品包埋或不包埋、冷凍保護(hù)處IR、快速冷凍切片、染包及鏡檢等步驟。適用于進(jìn)行形態(tài)學(xué)、細(xì)胞化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)研究。
用戶經(jīng)培訓(xùn)后取得資格可自行使用超薄切片機(jī),使用步驟如下:
1)開機(jī)
2)檢查是否處于切片模式,檢查頂光底光是否亮度正常;
3)將包埋塊放入適當(dāng)夾頭并用六角扳手旋緊,以固定包埋塊;(然后將夾頭安裝在修快臺進(jìn)行修快);
4)將夾頭放入機(jī)械臂,并用手旋好螺絲上緊夾頭(不可用六角扳手);
5)將玻璃刀/鉆石刀安裝在刀臺上,用手旋好螺絲以固定刀,并注意檢查刀臺是否固定于底座上;
6)檢查刀間隙角,調(diào)整刀臺角,選擇適當(dāng)?shù)膴A頭角度等;
7)設(shè)定切片窗口(上下范圍);
8)對刀;
9)選擇所用切片速度和厚度;
10) 在刀槽內(nèi)注水,注意水面平整;
11) 切片、撈片;
12) 關(guān)機(jī)、清理切片機(jī),拿走個人物品,保持切片臺面整潔;
13) 登記使用記錄。
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