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利用液體閃爍計(jì)數(shù)器測(cè)量瞬時(shí)化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度

瀏覽次數(shù):7961 發(fā)布日期:2010-2-9  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
摘要:通過加工一個(gè)帶有注射孔的測(cè)量室頂部鉛蓋,蔣自動(dòng)液體閃爍計(jì)數(shù)器改裝成一種發(fā)光分析儀改裝后的液體閃爍計(jì)數(shù)器既能測(cè)量發(fā)光強(qiáng)度,又能測(cè)量射線,且測(cè)量目射線性能不變。發(fā)光強(qiáng)度的測(cè)量性能與專用發(fā)光分析儀具有良好的相關(guān)性,且靈敏度高于專用發(fā)光分析儀。
 
關(guān)鍵詞:發(fā)光分析儀;液體閃爍計(jì)數(shù)器
 
目前,發(fā)光分析技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域得到越來越廣泛的應(yīng)用,各種專用發(fā)光分析儀也相繼問世,但價(jià)格較貴。用于口射線測(cè)量的液體閃爍計(jì)數(shù)器,實(shí)際上是測(cè)量射線作用下閃爍體的發(fā)光,這種發(fā)光是一種穩(wěn)定的,而且是多光子的事件]。生物化學(xué)發(fā)光一般為瞬時(shí)的,且為單光子事件,它的發(fā)光值在反應(yīng)物相互接觸的瞬時(shí)達(dá)到最大,然后迅速下降。因此,直接利用液體閃爍計(jì)數(shù)器測(cè)量生物化學(xué)發(fā)光受到了限制。

我們對(duì)液體閃爍計(jì)數(shù)器的測(cè)量室進(jìn)行了改裝.改裝的液體閃爍計(jì)數(shù)器能與專用的發(fā)光分析儀一樣方便地加樣,解決了液體閃爍計(jì)數(shù)器不能及時(shí)加樣及時(shí)測(cè)量的問題,進(jìn)而用于生物化學(xué)發(fā)光的測(cè)量。
 
1 材料和方法
將FJ一2115自動(dòng)液體閃爍計(jì)數(shù)器(西安262廠生產(chǎn))頂蓋打開,移去測(cè)量室頂都鉛蓋,裝上專門加工的帶有注射小孔的鉛蓋,并加用黑色橡皮墊圈,以避免光線透入。選擇相加測(cè)量方式,利用熒光素酶ATP發(fā)光體系對(duì)改裝的裝置進(jìn)行測(cè)試:①用NaOH一甘氨酸緩沖液將熒光素酶(中科院上海植物生理研究所)配制成3.5mg/ml的濃度②將ATP標(biāo)準(zhǔn)(德國B.M公司)用Tris—HC1緩沖液稀釋成1×10 -8mol/L,l×10 mol/I,……1×10 -11mol/L的標(biāo)準(zhǔn)系列濃度。③分別取各標(biāo)準(zhǔn)液200uL加入發(fā)光管中。④將發(fā)光管送人測(cè)量室后.從注射孔注入800 uL熒光素酶溶液,測(cè)6s的發(fā)光值N。
 
2結(jié)果
2.1發(fā)光測(cè)量
將各標(biāo)準(zhǔn)液的6s發(fā)光值Ni減去本底值No,并取對(duì)數(shù)得:Yi=lg(Ni-No),將濃度c取對(duì)數(shù)得:Xi=lgCi,以Yi為縱坐標(biāo),Xi為橫坐標(biāo)作圖(圖1)。
 
FJ一2115的測(cè)量結(jié)果與LKB一1251(瑞典LKB公司生產(chǎn)的發(fā)光分析儀)的測(cè)量結(jié)果具有良好的相關(guān)性(r=098),且FJ一2115的靈敏度略高于LKB1251。

2.2穩(wěn)定性
對(duì)同一濃度的ATP分別用IKB1251和改裝的FJ一2ll5液體閃爍計(jì)數(shù)器重復(fù)測(cè)量20次,其誤差分別為7.8和8.1,兩者結(jié)果相近.無顯著性差異。

2.3改裝的FJ一2115對(duì)B射線謝量的影響
改裝前。H的測(cè)量效率為51.2%.本底為15CPM,品質(zhì)因素為58.25改裝后H的測(cè)量效率為51.1,本底為48CPM,品質(zhì)因素為54.4。
 
 
3 討論
液體閃爍計(jì)數(shù)器是用來測(cè)量p射線的專用儀器,有兩個(gè)光電倍增管,采用符合測(cè)量方式(即兩個(gè)光電管同時(shí)有信號(hào)時(shí)才給出信號(hào).否則無信號(hào)輸出)。如果用它來測(cè)量諸如生物化學(xué)發(fā)光之類的單光子事件時(shí),則需采用相加測(cè)量方式,這樣,其測(cè)量效率就比單光電倍增管的專用發(fā)光分析儀要提高一些,同時(shí)噪聲信號(hào)也會(huì)有所增加。本研究將自動(dòng)液體閃爍計(jì)數(shù)器改裝成能及時(shí)加樣及時(shí)測(cè)量的發(fā)光分析儀,其測(cè)量性能與專用發(fā)光分析儀相近,有些指標(biāo)還要好于專用發(fā)光分析儀。發(fā)揮了一機(jī)多能的作用,在不增加投資的條件下,為擁有液體閃爍計(jì)數(shù)
器的單位開展化學(xué)發(fā)光分析研究提供了方便。改裝后的液體閃爍計(jì)數(shù)器同樣可以測(cè)量p射線。
(來源:華中科技大學(xué)學(xué)報(bào) 舒柏華 張利平 徐順清)

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