1.常見樣本類型：
分泌物、血液、脾臟、扁桃體、腎臟和淋巴結等樣本中的非洲豬瘟。
 
 
2.. 樣品預處理方式（樣本處理區）
2.1 樣本前處理
2.1.1組織樣品：每份組織分別從 3 個不同的位置稱取樣品約 1g，手術剪剪碎混勻后取
0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續研磨，待勻漿后轉至 1.5mL 滅菌離心管中，8000rpm 離心2min，取上清液 200μL 于 1.5mL 滅菌離心管中；
2.1.2全血樣本：取全血 200μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。
相關實驗設備：動物組織研磨儀、手持式電動組織研磨儀

根據樣本數量多少可用高通量組織破碎儀或者手持式組織研磨儀破碎組織樣本，之后用離心機將樣本離心分層，取上清液。
2.2樣本保存和運輸
上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月，標本運送應采用 2~8℃冰袋運輸，嚴禁反復凍融。
 
2.3 DNA 提取
對上述處理好的標本加入到預裝好提取試劑的96深孔板中，將加好樣本的耗材放置到96全自動核酸提取儀中提取核酸。
 
96全自動核酸提取儀用于病毒核酸的提取，配套提取試劑可以以散裝形式提供，也可以以預裝的形式提供，96高通量移液工作站可以用于散裝試劑的分裝。

 
3. 試劑配制（試劑準備區）
根據待檢測樣本總數，設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，將上游引物、下游引物、熒光定量探針、酶液預混好，將混合好反應液分裝到 PCR 反應管中。

試劑	用量
非洲豬瘟病毒熒光PCR引物探針Mix	1.6 uL
非洲豬瘟病毒熒光PCR Premix	10 uL
提取樣品ＤＮＡ	2 uL
RNase free H2O	6.4 uL
反應總體積	20 uL

 
 

 
 
 
 
根據樣本的多少可以選用96高通量移液工作站或移液排槍進行體系的配置和分裝。
 
4. 加樣（樣本處理區）
將提取的 DNA、陽性質控品、陰性質控品各取一定量，分別加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

 
 
 
 
 
 
5. PCR 擴增（核酸擴增區）
5.1 將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內；
5.2 設置好通道、樣品信息，反應體系設置為 20μL；
熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光，選擇 None 即可。
5.3 相關設備：
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

 
 

• 若使用ABI 7300 PCR 儀，每個反應需要加入0.4 uL的ROXⅠ（終濃度為1X）
• 若使用ABI 7500 PCR儀，每個反應需要加入0.2 uL的ROX Ⅱ（終濃度為0.5X）

PCR 反應循環條件設置

步驟	循環數	溫度	時間	熒光通道
1	1	95	0:30
2	40	95	0:10
		60	0:34	收集FAM熒光

 
 
6. 結果分析判定
6.1 結果分析條件設定
設置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結果分析，當曲線出現整體傾斜時，根據分析后圖像調節Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內調節)、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結果。

 
 

無錫百泰克生物技術有限公司位于太湖明珠-江蘇無錫，是一家專業型的高科技生物技術企業。公司致力于研究分子診斷和快速檢測業務，尤其在核酸提取方面成績卓著。公司現有辦公區域、生產基地面積超50000平米。經不斷努力，截至2022年，無錫百泰克生物科技有限公司擁有48項授權專利，并通過了ISO13485質量管理體系認證。

新冠疫情爆發后，百泰克迅速投身全球抗疫事業，堅守抗疫一線并推出系列檢測產品，其產品高效與穩定性受到國內外廣泛認可。