近年來，阻礙人類健康長壽的第一大殺手就是疾病，例如癌癥，是目前最難攻克的疾病之一。疾病研究和藥物開發(fā)也一直是生命科學(xué)領(lǐng)域的專家學(xué)者不斷攻克的領(lǐng)域。而目前的研究顯示，人類的大多數(shù)疾病都會與細(xì)胞因子表達(dá)異常引起信號通路異常有關(guān)。

 

報告基因?qū)τ诨�因表達(dá)的研究來說是非常有用的工具，它可以代替要研究的目的基因，從而幫助我們了解目的基因的信號通路和相關(guān)的疾病。熒光素酶是最常用的報告基因，使用光度計和化學(xué)發(fā)光功能的微孔板讀板機(jī)我們可以很容易的檢測到熒光素酶，另一方面，由于在細(xì)胞實驗中其背景較低，因此具有很高的靈敏度。我們通常用螢火蟲熒光素酶表達(dá)水平高低反映出我們感興趣的基因在系統(tǒng)中的地位。而海腎來源的熒光素酶則更常在多熒光實驗中作為第二種報告基因，來規(guī)范化多種在不同樣本中變化較大的指標(biāo)如轉(zhuǎn)染效率，細(xì)胞活力等。

 

NF- κB是參與細(xì)胞進(jìn)程中許多基因表達(dá)的“主要調(diào)節(jié)者”，如炎癥，免疫，分化，增殖和凋亡。腫瘤壞死因子α (TNF- α)可以激活細(xì)胞信號通路來降解NF- κB的抑制劑，從而促使其釋放并進(jìn)入核內(nèi)，調(diào)節(jié)數(shù)百目的基因的表達(dá)。NF- κB通路的紊亂可以誘發(fā)多種疾病，如多發(fā)性硬化病，糖尿病，阿爾茲海默病等，因此利用合適的工具加深我們對NF- κB通路的理解是十分必要的。

 

 

SpectraMax® DuoLuc™ Reporter 試劑盒可以對哺乳動物細(xì)胞中的螢火蟲和海腎熒光素酶進(jìn)行高靈敏度的定量。依次向微板孔中加入兩種適量的反應(yīng)試劑即可檢測熒光。這種雙熒光信號檢測系統(tǒng)可以在歸一化檢測熒光信號(螢火蟲熒光)的同時提供持續(xù)表達(dá)的對照熒光信號(海腎熒光)。運用SpectraMax® iD5 多功能微孔板讀板機(jī)、注射器系統(tǒng)和 SmartInject™ 技術(shù)可以將實驗條件最優(yōu)化。在這里我們將展示如何在哺乳動物細(xì)胞模型中， 通過雙熒光報告檢測系統(tǒng)和SpectraMax iD5 微孔板讀板機(jī)來檢測核轉(zhuǎn)錄因子κB (NF- κB)的活性。