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伯齊科技推出高通量低體積熒光核酸定量方案

瀏覽次數(shù):3890 發(fā)布日期:2016-9-1  來源:本站 本站原創(chuàng),轉載請注明出處

 

BMG公司CLARIOstar多功能酶標系統(tǒng)優(yōu)化PicoGreen核酸定量法

      對核酸樣品的定量是任何基于和分子生物學實驗室最基本的需求。除了大家熟知的傳統(tǒng)260 /280紫外吸收分析法外,還有很多基于熒光分析的DNA定量方法。這類熒光定量法不僅靈敏度遠遠高于光吸收法,它們還可以針對雙鏈DNA進行定量。在市場上比較有名的就是Life Technology公司的PicoGreen試劑,它是可跟雙鏈核酸結合的特異性熒光探針。在很多對核酸濃度要求比較高的實驗中,如二代測序,經(jīng)常會用到這種熒光定量方法。
      除了分析靈敏度以及特異性,通量以及微量分析體積也是現(xiàn)有用戶經(jīng)常面對的問題。雖然市面上也有熒光定量儀去配合PicoGreen試劑,但每次只能做一個樣本。對于很多服務性企業(yè),特別是測序服務商,每天面對幾百個樣本,在核酸定量這一環(huán)就要花大半天去完成,費時失事。所以市場上非常渴望高通量、低反應體積和高準確度的核酸定量方案。然而,這種新需求對檢測設備的要求非常之高。針對這種需求,德國專業(yè)酶標儀生產(chǎn)公司BMG LABTECH推出了基于獨特的LVF光柵的CLARIOstar多功能酶標儀,并在該系統(tǒng)上優(yōu)化了 PicoGreen核酸定量方法,是高靈敏度、高特異性、高通量、微體積樣品核酸定量的最優(yōu)解決方案。
      該優(yōu)化方案分別對BMG公司生產(chǎn)的LVis微量板(2μL體系)、市面上常見的96孔板和384孔板分別進行了測試和優(yōu)化,并對比了基于CLARIOstar特有的LVF光柵以及優(yōu)化濾光片兩種濾光系統(tǒng)的結果,進一步驗證該方案的優(yōu)越性(圖1,2和3)。
      所有實驗結果數(shù)據(jù)充分說明,使用CLARIOstar多功能酶標儀進行PicoGreen核酸定量,在超大濃度梯度范圍內(nèi)都有非常好的檢測靈敏度和線性度。CLARIOstar獨特的LVF光柵具備了與濾光片基本相同的高性能 。例如,在384孔板在,無論是采用濾光片或是采用LVF光柵,其檢測最低極限都可以低至3pg/孔。采用基于CLARIOstar多功能酶標儀的PicoGreen核酸定量法,可以進行任意體積核酸樣品的精確定量——最低2μL到384孔或96孔的標準檢測體積。事實上BMG酶標儀的高靈敏度和穩(wěn)定性已廣泛得到國內(nèi)用戶認可,其中國內(nèi)測序服務龍頭—華大基因(BGI),已先后添置十多臺BMG系統(tǒng)進行核酸定量檢測,充分說明BMG LABTECH多功能酶標儀在高通量核酸定量的優(yōu)越性與可靠性。

圖1:96孔板PicoGreen分析法,采用濾光片(紅色)以及LVF光柵(藍色)的結果對比圖,樣品體積200μL,整個檢測DNA濃度范圍內(nèi)都有非常好的線性度:濾光片:R2 = 0.9999,LVF光柵:R2 = 0.9998

圖2:384孔板PicoGreen分析法,采用濾光片(紅色)以及LVF光柵(藍色)的結果對比圖,樣品體積20μL,整個檢測DNA濃度范圍內(nèi)都有非常好的線性度:濾光片:R2 = 0.9999,LVF光柵:R2 = 0.9998

圖3: LVis微量板PicoGreen分析法,采用濾光片(紅色)和LVF光柵(藍色)的結果對比圖,樣品體積2μL

 

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